Все проводимые экспертизы, несмотря на ведомственную принадлежность лаборатории, укладываются в рамки разработанных и утвержденных методик. Несмотря на частные отличия методик производства судебных биологических (молекулярно-генетических) экспертиз конечным их этапом является оценка результатов исследования и формулирование выводов с обязательной стадией вероятностно-статистических расчетов полученных данных. Алгоритмы расчетов и критерии интерпретации полученных значений разнятся, но, несмотря на это, есть экспертные случаи, в которых применим единый подход. В частности, к таким случаям относятся экспертизы по установлению родства.
В зависимости от степени родства и от количества генотипов, участвующих в подсчете вероятности, зависит и достоверность полученных результатов. Исходя из алгоритма расчетов, чем больше участников и чем ближе степень родства, тем, при прочих равных условиях, выше достоверность полученного результата.
Но есть случаи, ограничивающие объективными причинами как количество лиц, участвующих в экспертизе в качестве источников генетических признаков устанавливаемого родства, так и расширяющих степень родства. При решении таких сложных экспертных задач, необходимо увеличивать количество сопоставляемых признаков, которыми в данное случае выступают STR-локусы, с целью повышения достоверности получаемых результатов.
До недавнего времени в экспертных учреждениях в качестве наборов, позволяющих расширить панель исследуемых признаков, выступали наборы западных производителей (Qiagen, Promega). Для локусов, включенных в эти наборы были обобщены статистические данные, разработаны методические рекомендации по частотам встречаемости аллелей в популяции нашей страны, которые и использовались при решении экспертных задач.
Однако, в настоящее время использование данных технических средств в нашей стране не представляется возможным. В качестве альтернативы используются разнообразные наборы восточных партнеров, маркерные панели, которых целиком или частично не совпадают друг с другом. Несомненно, что с прошествием времени появятся методические рекомендации с частотами встречаемости и по «новым» локусам, а значит количественные характеристики применяемых наборов выходят на ведущие позиции.
Поскольку при установлении родства в качестве объектов исследования в подавляющем большинстве случаев выступает сложный для работы биологический материал (костные останки, парафиновые блоки, влажный архив и прочее), то, несомненно, и сами применяемые для расширения маркерной панели наборы должны обладать всеми свойствами качественного криминалистического набора для амплификации, включая чувствительность и устойчивость к ингибиторам.
В качестве основного набора для амплификации в целях решения подобных экспертных задач мы предлагаем набор «ИмпульсТест А29», позволяющий амплифицировать 24 аутосомных локуса при внесении 0,00625 нг ДНК в реакционную смесь, а также содержащий 3 полиморфных STR-локуса Y-хромосомы, которые также, можно включить в подсчет совокупной вероятности. В простых случаях (родительская пара-ребенок) одного этого набора будет достаточно для решения поставленных вопросов по существу.
В качестве дополнительных средств для расширения маркерной панели мы предлагаем использовать продукцию компании Sorenson Forensic (КНР). Данной компанией были разработаны наборы, специально предназначенные для сложных экспертных случаев по определению родства с использованием анализа как аутосомных маркеров, так и локусов половых хромосом (для установления патрилинейного и матрилинейного родства). Ниже представлены характеристики наборов для амплификации аутосомных локусов, и общее количество анализируемых ими маркеров.
SF 21+1 STR Kit (Амелогенин и 21 дополнительных аутосомных STR локусов человека);
SF 21+1FS STR Kit (Амелогенин, 1 Y-STR локус, 1 X-STR локус и 21 дополнительных аутосомных STR-локуса человека);
SF 21HS STR Kit (Амелогенин, 1 Y-STR локус и 19 дополнительных аутосомных STR локусов человека);
Применяя любой из этих наборов в дополнении к основному набору «ИмпульсТест А29» можно проанализировать от 40 до 42 аутосомных локусов. При использовании одновременно двух дополнительных наборов это число составит уже 57-59 локусов. И, наконец, использование всех трех наборов с основным набором, позволяет проанализировать до 75 аутосомных локусов, включив предоставляемые производителем частоты по каждому из них в вероятностно-статистические расчеты при установлении дальнего родства. Важно отметить, что каждый из трех дополнительных наборов рассчитан на проведение 50 реакций в объеме 25 мкл реакционной смеси.
Для случаев установления патрилинейного родства, в зависимости от рассматриваемых гипотез, мы предлагаем к использованию наборы для исследования маркеров Y-хромосомы, которые позволяют амплифицировать от 37 до 56 полиморфных локусов.
- SF Y37+5 STR Kit (37 Y STR локусов + 5 Y indel локусов человека);
- SF Y43CS STR Kit (38 Y STR локусов человека + 5 Y indel человека);
- SF YNFS Y STR Kit (44 Y STR локуса и 5 Y indel локусов человека);
- SF Y SUPP Plus STR Kit (31 Y STR локус человека + 1 Y indel локус человека);
- SF Y56+5 STR Kit (56 Y STR локусов + 5 Y indel локусов человека);
В зависимости от решаемых задач можно выбрать наборы, панель которых преимущественно содержит высоко мутирующие локусы (для детерминации конкретных патрилинейных родственников), либо, наоборот, локусы с низкой степенью мутации (возможность установление дальнего патрилинейного родства). Кроме того, наборы имеют повышенную чувствительность (до 0,003 нг ДНК в реакции для набора «SF Y43CS STR Kit» и до 0,005 нг ДНК в реакции для набора «SF YNFS Y STR Kit») и высокую устойчивость к ингибиторам.
Наконец, для решения сверхсложных задач, требующих применение анализа митохондриальной ДНК мы можем предложить уникальный набор реагентов «SF mtDNA-SNP 60 Kit» для исследования митохондриальных SNP локусов методом фрагментного анализа. Данный набор позволяет проанализировать 58 SNP, один CA динуклеотидный повтор в позиции 514–523 (3-8), межлокусную делецию в 9 п.о. между локусами COII/tRNALys, 8 локусов в пределах гипервариабельной области (шесть при HVI, один при HVII и один при HVIII).
Применяемый подход позволяет анализировать получаемые данные на привычном для HID программном обеспечении, а производить подсчет в соответствии с утвержденными для такого рода анализа методикой. В дополнении к вышеперечисленным характеристикам приятной и полезной для пользователя особенностью данного набора является его чувствительность, которая позволяет проанализировать пробы с содержанием ДНК до 0,005 нг в реакционной смеси.
В заключении, следует отметить, что продукция компании Sorenson Forensic успешно используется в криминалистических лабораториях различных ведомств, а один из стандартных наборов для амплификации «SF 25 STR Kit» успешно прошел апробацию в ЭКЦ МВД России. Наша компания, как официальный поставщик продукции, традиционно оказывает техническую поддержку в течении всего срока эксплуатации поставленного товара.